Tema: Modelado de la enfermedad del hígado graso no alcohólico con células madre pluripotentes humanas derivadas de células inmaduras similares a los hepatocitos
Tipo de Células madre: Células madre pluripotentes inducidas, derivadas de fibroblastos del prepucio fetal de un individuo sano
Método de obtención.- Por re programación:
1) hPSC se cultivaron en placas recubiertas con Matrigel en medio TeSR E8 con cambio diario
2) 1-2 días después se indujo la diferenciación en endodermo definitivo con medio de endodermo definitivo: 96% RPMI 1640, 2% B27, 1% P / S, 100 ng / ml de activina A.
3) Después de 5 días, el medio se cambió a medio de endodermo hepático (78% de DMEM Knockout, 20% de suero Knockout, 0.5% Glx, 1% P / S, 0.01% 2-Mercaptoetanol y 1% DMSO ). La forma poligonal característica de los hepatocitos ya es evidente
4) Después de 5 días, se continuó la diferenciación con medio HLC : (Leibovitz 15 al 82%, suero de ternero fetal 8%, caldo de fosfato de triptosa 8%, Glx al 1%, P / S al 1% con insulina 1 μM , 10 ng / ml de (HGF), 20 ng / ml de (OSM) y 25 ng / ml de (DEX); con cambio diario.
Vía de administración: parental
Resultados.-
Corto plazo: Las tinciones con anticuerpos para los marcadores de hepatocitos albúmina, HNF4α y E-Cadherina fueron todas positivas, varias pruebas de actividad indicaron que las HLC se comportan como hepatocitos. Fueron capaces de sintetizar urea y transportadores activos.
Mediano plazo: Para analizar la esteatosis se dió la inducción de LD en HLC, que se basa en la adición de 50 μM OA durante 48 h en el medio, se observó aumento en la acumulación de LD , La expresión de PLIN2 aumentó y de genes implicados en el metabolismo de los lípidos
Largo plazo: Altera la expresión de microARN específicos del hígado como miR-122 y miR-106b. Para encontrar indicaciones para tratamientos se demostró que agonistas de PPARα por transferencia a células HepG2 reducía la carga de grasa y la expresión de AGPAT2 y HMGCR , que están involucrados en la biosíntesis de fosfolípidos y colesterol.
