Imagen tomada de https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5837635/figure/kfx120-F5/?report=objectonly
Tema:
La enfermedad hepática grasa no alcohólica es un factor de susceptibilidad a
los efectos hepáticos inducidos por el percloroetileno en ratones
O: Evaluar el efecto de NAFLD experimental preexistente en el ratón sobre los efectos hepáticos de percloroetileno
M: Tejido hepático
AN: ADNc obtenido previamente de ARNm.
- Por método físico las muestras del lóbulo izquierdo del hígado se pulverizaron en nitrógeno líquido utilizando CellCrusher ™ .
- El ADNc fue sintetizado usando el kit de archivo de ADNc de alta capacidad Thermo Fisher Scientific.
Gen a amplificar: Ehhadh, Acot1, Acox1
PCR: Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con transcriptasa inversa cuantitativa (qRT-PCR) usando Applied Biosystems TaqMan ™ ® con Roche Light Cycler 480.
Pasos:
- T° se eleva para desnaturalizar el ADNc , la señal del colorante fluorescente en el extremo de 5' de la sonda TaqMan es apagada por el NFQ en el extremo de 3'.
- T° de reacción se reduce para permitir que los cebadores y la sonda se recojan en sus secuencias específicas.
- Se sintetiza nuevas cadenas usando los cebadores sin marcar y la plantilla, cuando alcanza una sonda TaqMan, su actividad nucleasa 5 'endógena escinde la sonda, separando el tinte del inhibidor.
V: Sondas TAQMAN
Referencias bibliográficas:
